基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞及方法

摘要

本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体,在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞,药物诱导表达山羊TET3,将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞,再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合,挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平,纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象,从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量,可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎,胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高。

关键词